✅ 高灵敏度：点击化学反应效率极高，信号清晰，背景噪声低。

✅ 高特异性：乙炔基和叠氮基在生物体内几乎不存在，反应背景极低。

✅ 生物相容性好：反应条件温和，对RNA损伤小。

✅ 多功能性：通过更换不同的叠氮报告分子，可以实现检测（荧光）、富集（生物素）等多种目的。

✅ 安全性：无需使用放射性标记物，操作简便更安全。

一次点击，即刻点亮RNA合成过程。

原理：5-Ethynyl-UTP可被RNA聚合酶直接掺入到新生RNA链中，取代部分天然UTP。

检测方法：掺入后，利用其末端的炔基（–C≡CH），可通过点击化学（Click Chemistry） 与叠氮（azide）标记的荧光染料或生物素反应，实现RNA可视化或富集。

典型反应体系：Cu(I)催化的叠氮-炔环加成（CuAAC）。

检测形式：

• 体外转录体系：可直接用5-Ethynyl-UTP替代UTP一部分（通常替代比例 5–20%）。

• 细胞内标记：常用 5-Ethynyl-uridine (EU)进入细胞后在体内磷酸化为5-Ethynyl-UTP。

• 检测化学试剂：推荐搭配Alexa Fluor 488-azide（荧光）或biotin-azide（富集）。